香菇（Lentinula edodes），又名香覃、花菇、香菌，具有降血压、降血糖、抗病毒、抗肿瘤、降血脂等多种药理活性，具备较好的医疗保健功效，古籍记载，香菇性平味甘，具有益气补虚、健脾养胃、益味助食、活血美容之功效。香菇嘌呤（Eritadenine）是香菇中的重要药理活性成分之一，也是香菇特有香味的重要来源，在香菇的整个生长周期均可合成。香菇嘌呤具有降血脂、预防血栓和血管疾病、保肝解毒、防脱发等多种医学保健作用，其中降血脂效果尤为显著，且不会造成代谢紊乱，也不会损伤人体器官，被认为是一种安全的功能性药食同源原料。因此，研究如何经济高效地利用香菇嘌呤开发功能保健食品具有重要意义。

咀嚼片是一种通过在口腔中咀嚼成细小颗粒后吞服的新型片剂，因其口感好、无需整片吞服、服用方便、片剂体积小、剂量准确、方便携带、质量稳定等特点，深受患者的青睐。以香菇中重要的活性物质香菇嘌呤为主要原料，辅以矫味剂、赋形剂、黏合剂、润滑剂等制作易于服用的咀嚼片，以单因素试验研究单一辅料对香菇嘌呤咀嚼片试验结果的影响，以正交试验优化分析多因素多水平对香菇嘌呤咀嚼片的影响，并根据试验结果优化其生产工艺。最后，通过各项质量指标的检测验证了香菇嘌呤咀嚼片的可行性。香菇嘌呤咀嚼片不仅可满足人们对药品安全性、 有效性的基本要求，还能在剂型设计上贴合不同人群的使用习惯。与此同时，咀嚼片在口腔中经过牙齿的咀嚼，迅速变为小颗粒，其表面积会显著增加。这为香菇嘌呤在体内溶解和快速吸收 奠定了基础，为临床治疗疾病提供了先决条件。

（一）仪器

ZP-5 型旋转式压片机，泰州市黎明制药机械有限公司产品；ZB-2型智能崩解仪，天津大学精密仪器厂产品；DZF-6020型真空干燥箱，上海基玮试验仪器设备有限公司产品；CJY-2A型片剂硬度脆碎度测定仪，上海黄海药检仪器有限公司产品；1260型高效液相色谱仪，美国安捷伦科技公司产品；RC-6型溶出度测定仪，天津市国铭医药设备有限公司产品。

（二）材料与试剂

香菇嘌呤，陕西缔都医药化工有限公司提供；氯贝丁酯、十二烷基硫酸钠（Sodium dodecyl sulfate， SDS），上海麦克林生化科技股份有限公司提供；总胆固醇、甘油三酯检测试剂盒，南京建成生物工程研究所提供；预胶化淀粉、蔗糖粉、山梨醇、甘露醇、硬脂酸镁，安徽山河药用辅料股份有限公司提供；阿斯巴甜，江苏维多股份有限公司提供；草莓香精，青岛腾原生物科技有限公司提供。

（三）试验动物

体重180~200g的8周龄SD大鼠60只，购自 郑州市惠济区华兴试验动物养殖场，动物生产许可证号：SCXK（豫）2025-0002；高脂饲料， 郑州市惠济区华兴试验动物养殖场提供。试验过程严格遵守“3R”原则。

（四）数据分析软件

根据单因素试验，利用 Design Expert 软件进行响应面优化设计，设计三因素三水平的响应面试验。

（一）含量及含量均匀度的测定

1.   色谱条件

参考文献的测定条件采用Waters Symmetry C18 型色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），在柱温 30 ℃，流速 1 mL/min，检测波长 260 nm，进样量 10 μL，流动相为甲醇∶磷酸盐缓冲液（pH 值 4.67）=7∶93的条件下，测定香菇嘌呤的含量。

2. 标准曲线方程

精密称取香菇嘌呤对照品适量，制备成质量浓度为 5，10，20，25，30，35 μg/mL溶液， 按照 2.1.1 中色谱条件测定含量。以香菇嘌呤质量浓度（C）与香菇嘌呤的峰面积（A）进行线性拟合，拟合方程为 A=7.525 84C-25.242 29 （R2 =0.999 7）。因此，香菇嘌呤在质量浓度 5~35 μg/mL时线性关系良好。

3. 方法学考查

按照文献的方法，略作修改进行专属性试验、精密度试验、重复性试验和加样回收率试验。

HPLC 专属性试验结果见图 1。

香菇嘌呤专属性试验结果表明，样品中香菇嘌呤的峰形及分离度较好，可用于香菇嘌呤咀嚼片的含量测定。取高（35 μg/mL）、中（25 μg/mL）、低（5 μg/mL）3 种不同质量浓度香菇嘌呤进行精密度试验和回收率试验，精密度试验测定结果的 RSD 分别为 0.63%，0.51%和 0.79%；香菇嘌呤对照品的高、中、低质量浓度回收率为100.02%，99.95%和99.22%，回收率 试验结果的RSD分别为0.78%，0.71%和 0.87%。 因此，所采用的含量测定方法符合分析要求。

4.   含量测定

取香菇嘌呤咀嚼片 10 片，研碎后加入适量甲醇，超声提取 10 min，以转速 7 000 r/min 离心 15 min，取上清液，用 0.22 μm 滤膜过滤，用甲醇稀释，定容后进样，计算含量。按公式（1）计算百分含量。

（二）多指标综合评分方法

以多指标的综合评分为正交试验优化指标。根据评分标准及其对香菇嘌呤咀嚼片品质的贡献进行评价，计算出各项指标的评分，将各项指标评分之和作为多指标综合评分。

多指标综合评分法见表 1。

1.   感官评定方法

由 10 名（男女比例 1∶1）具有相关经验的品评员，以试吃的方式对咀嚼片进行感官评价，品评员严格按照食品安全地方标准（DBS 65/021—2020）中的评价方法和规范，从外观、组织、气味与口感4个方面对香菇嘌呤咀嚼片进行评分。按照表 1 的计算方法，计算出优化试验的最终感官评分。感官评分为外观、组织、气味与口感 4 个指标评分之和。

感官评定标准见表 2。

2. 质量差异的测定

按照抽样规则，抽取 20 片样品，精密称量，按照中国药典的要求，计算质量差异。所制备的样品平均片质量约为 0.55 g，故质量差异限度为±5.0%。20 片质量差异的最大值作为质量差异评价指标。

3. 硬度和脆碎度的测定

按照《中华人民共和国国药典》的要求， 采用片剂硬度脆碎度测定仪测定香菇嘌呤咀嚼片的硬度和脆碎度，平行测定 5 次，其中硬度取平均值，脆碎度取最大值。

（三）单因素试验优化

在参考类似文献和预试验结果的基础上， 设计香菇嘌呤咀嚼片的基础处方和制备工艺为香菇嘌呤 1.0 g，蔗糖粉 25.0 g，预胶化淀粉 10.0 g，混合矫味剂（山梨醇∶甘露醇∶阿斯巴甜∶草莓香精 = 100∶100∶2∶0.5， 质量比）15.0 g，采用等量递加法将其混合均匀， 加入润湿剂制备软材，采用装有 20 目筛网的颗粒机制备湿颗粒，采用 50 ℃真空干燥至含水量小于 3%，用 16 目尼龙筛网整粒，加入干颗粒总质量 1.0%的硬脂酸镁，混合均匀后用旋转式压片机压片，即得香菇嘌呤咀嚼片成品。

各因素用量对香菇嘌呤咀嚼片感官评价的影响见图 2。

1. 蔗糖粉用量的筛选

以多指标综合评分为评价指标，固定基础处方中除蔗糖粉之外其他原辅料的用量，改变蔗糖粉用量（15.0，20.0，25.0，30.0，35.0 g），进行单因素优化试验。

由图 2（a）可知，随着蔗糖粉用量的增加，香菇嘌呤咀嚼片的综合评分先快速升高， 达到最大值后又开始下降，这主要是由于具有甜味的蔗糖粉改善了香菇嘌呤咀嚼片的口感、滋味与气味，提高了感官评分，促使了多指标综合评分也逐渐升高；但当蔗糖粉用量过高时，咀嚼片中其他辅料的相对含量降低，影响了咀嚼片的品质，从而降低了综合评分。由单因素试验结果可知，当蔗糖粉用量为 25.0 g 时，香菇嘌呤咀嚼片的综合评分最高。

2. 预胶化淀粉用量的筛选

以多指标综合评分为评价指标，固定基础处方中除预胶化淀粉之外的其他原辅料的用量不变，改变预胶化淀粉用量（5.0，7.5，10.0，12.5，15.0 g），进行单因素优化试验。

由图 2 （b）可知，预胶化淀粉用量为 10.0 g 时，多指标综合评分最高。当预胶化淀粉用量小于 3.0 g 时，随着预胶化淀粉用量的逐渐升高，外观、质量差异、硬度和脆碎度4个评价指标的评分逐渐升高，致使多指标综合评分也逐渐升高，这主要与预胶化淀粉改善了物料的可压性，提升了外观、质量差异、硬度和脆碎度4个指标的评分有关。当预胶化淀粉用量超过 10.0 g 时，咀嚼片的综合评分开始逐渐下降， 随着预胶化淀粉用量的增加，会使具有甜味的 蔗糖粉和混合矫味剂的相对含量降低，使感官评分降低，从而导致咀嚼片的综合评分逐渐开始下降。由此得出，预胶化淀粉用量为 10.0 g 时较适宜。

3. 混合矫味剂用量的筛选

以多指标综合评分为评价指标，固定基础处方中除混合矫味剂之外其他原辅料的用量不变， 改变混合矫味剂用量（5，10，15，20，25 g），进行单因素优化试验。

由图 2 （c）可知，混合矫味剂用量为 15 g 时，香菇嘌呤咀嚼片的综合评分最高。混合矫味剂中的甘露醇和山梨醇在口腔中溶解时吸收热量，会产生清凉甜爽感觉，改善咀嚼片的口感、 滋味与气味可增加咀嚼片的清凉感，所以当混合矫味剂用量较小时，随着用量的增加，感官评分逐渐升高，使多指标综合评分也逐渐升高。当混合矫味剂用量大于 15 g 时，咀嚼片的综合评分逐渐趋于平稳，并有略微下降的现象，混合矫味剂用量超过最佳用量后，并不能一直提高感官评分，相反随着混合矫味剂用量的增加，过浓的清凉感和香精的味道会降低组织、滋味与气味的评分，从而导致咀嚼片的综合评分略微下降。 因此，混合矫味剂用量以 15.0 g 时较适宜。

4.   硬脂酸镁用量的筛选

以多指标综合评分为评价指标，固定基础处方中除硬脂酸镁之外其他原辅料的用量不变， 改变硬脂酸镁添加量（干颗粒总质量的 0.5%， 1.0%， 1.5%， 2.0%， 2.5%）。硬脂酸镁是常用的疏水性润滑剂，利于片剂表面光洁美观。

由图 2（d）可知，随着硬脂酸镁添加量的升高，多指标综合评分也逐渐升高，达到最大值后，开始逐渐下降。这主要与硬脂酸镁能使物料表面变光滑，降低摩擦力和黏着力，增加物料流动性，使其更易填充到压片机模具中，保障压片顺利，进而提高了质量差异、硬度和脆碎度的评分；但当硬脂酸镁添加量过大时，多指标综合评分的降低，咀嚼片变软、易破碎，不利于贮藏和运输，还会影响口感，降低口感、硬度和脆碎度的评分。由此得出，硬脂酸镁添加量为 1.5%时较适宜。

（四）正交优化试验

在单因素试验结果的基础上，结合文献报道，选取蔗糖粉用量（A）、预胶化淀粉用量 （B）、混合矫味剂用量（C）和硬脂酸镁添加量 （D）为优化对象，对 A、B、C、D 这4个因素各取3个不同水平，进行正交试验优化试验。采用正交设计助手 II V3.1 软件设计L₉（3⁴）正交试验，以多指标评分作为评价指标，考查不同因素对香菇嘌呤咀嚼片品质的影响，并筛选出最佳配方。

正交试验因素与水平见表 3，正交试验结果见表 4，方差分析见表 5。

由表 4 可知，9 组正交试验中A₂B₃C₁D₂配方的综合评分最高。由表 5 可知，影响香菇嘌呤咀嚼片多指标综合评分因素的主次顺序为蔗糖粉用量（A）>混合矫味剂用量（C）>预胶化淀粉用量（B）>硬脂酸镁添加量（D），蔗糖粉用量（A）对香菇嘌呤咀嚼片品质有极为显著影响 （p<0.01），混合矫味剂用量（C）对香菇嘌呤咀嚼片品质有显著影响（p<0.05），预胶化淀粉用量（B）和硬脂酸镁添加量（D）对其影响 不显著，且 B 因素对多指标综合评分的影响大于 D 因素。通过对正交试验结果的综合分析， 可知最佳配方为 A₂B₂C₁D₂，即蔗糖粉用量 25 g，预胶化淀粉用量 10 g，混合矫味剂用量 15 g，硬脂酸镁添加量 1.5%。

（五）工艺验证

采用上述最优制备条件，制备 3 批次香菇嘌呤咀嚼片，制备的香菇嘌呤咀嚼片为圆形片状制剂，颜色均匀、大小一致，表面光滑无缺损，质地坚实；入口绵甜，具有草莓的滋味与气味，随后出现清凉感；硬度适中，易于咀嚼。按 2.2 中的评分标准，从外观、组织、口感、滋味与气味、质量差异、硬度和脆碎度等方面对制备的 3 批次香菇嘌呤咀嚼片做出综合评价。

香菇嘌呤咀嚼片的品质分析结果（X±S， n=3）见表 6。

由表 6 可知，香菇嘌呤咀嚼片的感官评分相对较高，表明咀嚼片的接受度较高；质量差异、硬度、脆碎度、药物百分含量和溶出度的评价结果均符合《中华人民共和国国药典》（2020 年版）的要求，表明优化后的香菇嘌呤咀嚼片制备方法稳定、可行。

（六）体外溶出度研究

采用符合《中华人民共和国国药典》的溶出度试验仪，在（37±0.5）℃下，在 900 mL 不同介质类型中进行，搅拌速度为 50 r/min。 检测的溶解介质包括水、0.2% SDS 水溶液、0.2% SDS 人工肠液（pH 值 6.8）和0.2% SDS 人工胃液。在 5，10，15，30，45，60，80 min 时取出 5 mL 溶出介质，并在相同的温度 下替换为等量的新鲜介质。提取的溶出介质通过 0.22 μm 膜过滤器过滤。用高效液相色谱法测定样品的峰面积，代入回归方程计算香菇嘌呤的质量浓度，并用公式（2）计算体外累积释放度。

由图 3 可知，时间为 20 min 时，香菇嘌呤咀嚼片在上述溶出介质中的溶出率均超过 55%，45 min 可溶出 90%以上，香菇嘌呤已基本释放完全。

（七）降血脂活性研究

氯贝丁酯在降血脂时，成人的口服剂量为每天750 mg，根据人鼠换算公式 S 大鼠 / 200 g = 0.018× S 人 / 70 kg，换算得大鼠灌胃剂量为每天13.5 mg/kg，故氯贝丁酯按13.5 mg/kg给药。适应性饲养 1 周后，SD 大鼠随机分为正常组、模型组、氯贝丁酯组和香菇嘌呤咀嚼片低、中、高剂量组，每组 10 只。正常组大鼠常规饲养；其余 5 组大鼠按 10 mg/kg腹腔注射 75%蛋黄乳液，自由饮水、禁食，16 h 后饲喂高脂饲料，连续喂养 4 周造模。氯贝丁酯组在造模同时灌胃给药氯贝丁酯 13.5 mg/kg。参考文献，香菇嘌呤咀嚼片高、中、低剂量组在造模同时分别灌胃香菇嘌呤咀嚼片4，2，1 mg/kg（以香菇嘌呤计，将香菇嘌呤咀嚼片研碎后， 用生理盐水混悬至2 mL，灌胃给药），正常组、 模型组灌胃等体积生理盐水，每日 1 次，连续 4 周。末次给药 24 h 后，各组大鼠腹腔注射质量分数为20%的氨基甲酸乙酯麻醉，腹主动脉取血，以转速 3 000 r/min 离心 10 min，取上层血清液，按试剂盒说明书，采用生化法检测大鼠血清中总胆固醇和甘油三酯的水平。

香菇嘌呤咀嚼片降血脂活性试验结果 （X±S， n=10）见表 7。

由表 7 可知，以大鼠血清中总胆固醇和甘油三酯为评价指标，与正常组比较，模型组造模成功（p<0.05）；氯贝丁酯组和香菇嘌呤咀嚼片低、中、高剂量组大鼠血清中总胆固醇和甘油三酯的水平明显低于模型组，且差异具有显著性 （p<0.05）；与氯贝丁酯组比较，香菇嘌呤咀嚼片高剂量组大鼠血清中总胆固醇和甘油三酯的水平差异均不显著（p>0.05），表明香菇嘌呤咀嚼片的高剂量组与氯贝丁酯组的降血脂作用无明显差别。虽然香菇嘌呤咀嚼片低、中剂量组大鼠血清中总胆固醇和甘油三酯的水平均显著高于氯贝丁酯组，但相对于模型组，香菇嘌呤咀嚼片低、中、高剂量组均可显著降低大鼠血清中总胆固 醇和甘油三酯的水平（p<0.05）。这与 TAKASHIMA K 等人报道的结论相似。